|
|
Separace a charakterizace atelokolagenu
Konečná, Zuzana ; Zubal, Lukáš (oponent) ; Vojtová, Lucy (vedoucí práce)
Cílem předložené bakalářské práce byla optimalizace separace rozpustného atelokolagenu z komerčně dostupného hovězího kolagenu a jeho následná charakterizace. Kollagen byl podroben enzymatickému trávení pomocí pepsinu a následně přečištěn pomocí filtrace, centrifugace a dialýzy. Získané vzorky byly následně charakterizovány pomocí infračervené spektrometrie, elektroforézy v polyakrylamidovém gelu a Hartree-Lowryho metody pro stanovení celkového obsahu proteinů. Vhodný časový rozsah enzymatického trávení pro získání vyhovujících výtěžků, byl určen na 60 – 70 hodin při hmotnostním poměru pepsinu a kolagenu 1:25. Nejvyšší výtěžek (72.6 %) byl získán při tomto poměru a době reakce 66 hodin. Dostatečné filtrace, která byla pro čistotu produktu klíčová, byla zajištěna kombinací filtračních technik s následnou centrifugací. Kvalita produktů z hlediska molekulových hmotností byla charakterizována pomocí gelové elektroforézy. Rozpustnost a její závislost na pH a koncentraci NaCl v roztoku byla měřena pomocí Hartree – Lowryho metody. Poměr mezi helikálním kolagenem a denaturovaným kolagenem ve vzorku byl měřen pomocí infračervené spektroskopie. Výsledná spektra se však nejevila zcela věrohodná. Jako vhodnější metodu pro zkoumání struktury kolagenu je možné použít například metodu cirkulárního dichroismu.
|
|
| |
|
| |
|
|
Separace a charakterizace atelokolagenu
Konečná, Zuzana ; Zubal, Lukáš (oponent) ; Vojtová, Lucy (vedoucí práce)
Cílem předložené bakalářské práce byla optimalizace separace rozpustného atelokolagenu z komerčně dostupného hovězího kolagenu a jeho následná charakterizace. Kollagen byl podroben enzymatickému trávení pomocí pepsinu a následně přečištěn pomocí filtrace, centrifugace a dialýzy. Získané vzorky byly následně charakterizovány pomocí infračervené spektrometrie, elektroforézy v polyakrylamidovém gelu a Hartree-Lowryho metody pro stanovení celkového obsahu proteinů. Vhodný časový rozsah enzymatického trávení pro získání vyhovujících výtěžků, byl určen na 60 – 70 hodin při hmotnostním poměru pepsinu a kolagenu 1:25. Nejvyšší výtěžek (72.6 %) byl získán při tomto poměru a době reakce 66 hodin. Dostatečné filtrace, která byla pro čistotu produktu klíčová, byla zajištěna kombinací filtračních technik s následnou centrifugací. Kvalita produktů z hlediska molekulových hmotností byla charakterizována pomocí gelové elektroforézy. Rozpustnost a její závislost na pH a koncentraci NaCl v roztoku byla měřena pomocí Hartree – Lowryho metody. Poměr mezi helikálním kolagenem a denaturovaným kolagenem ve vzorku byl měřen pomocí infračervené spektroskopie. Výsledná spektra se však nejevila zcela věrohodná. Jako vhodnější metodu pro zkoumání struktury kolagenu je možné použít například metodu cirkulárního dichroismu.
|
host ::
RSS.